黃曲mei毒素是由黃曲霉菌和寄生曲霉產(chǎn)生的一類代謝產(chǎn)物,具有*的毒性和致癌性,能引起多種動物發(fā)生癌變,主要誘發(fā)肝癌。黃曲mei毒素廣泛存在于糧油食品中,其中以花生和玉米污染zui為嚴重,一般以熱帶和亞熱帶地區(qū)的飼料污染較重。由于它的劇毒性、強致癌性及存在的廣泛性, 因此建立方便、 快速、 穩(wěn)定的檢測方法顯得尤為重要。
以下是飼料中黃曲mei毒素的HPLC測定的詳細檢測方法。
1儀器與試劑
1.1 儀器
安捷倫液相色譜儀
色譜柱 150mm×4.6mm×5μm
Waters 2475 多通道熒光檢測器
自制凈化柱
1.2 試劑
甲醇，色譜純。
乙腈，色譜純。
三氟乙suan。
正己烷。
硅膠。
中性氧化鋁。
聚酰胺粉。
黃曲mei毒素標準樣品：純度≥99%。
2 液相色譜儀測定飼料中黃曲mei素含量的試樣溶液的制備
2.1 試樣的提取和凈化
使用粉碎機將飼料樣品研細, 稱取研細樣品置于燒瓶或攪拌瓶中, 加入體積分數(shù)為84%的乙腈溶液, 在旋轉(zhuǎn)震蕩器上震蕩。用漏斗、定性濾紙將其過濾到樣品瓶中, 將過濾液通過自制凈化柱凈化, 棄去前面的, 然后將凈化液轉(zhuǎn)移至潔凈的棕色瓶中, 在水浴60℃條件下用氮氣吹干。
2.3 柱前衍生條件
向氮氣吹干的剩余物中加入正己烷、三氟乙suan,立即旋緊蓋子。渦旋, 在40℃烘箱中衍生，室溫下氮氣吹干混合物, 用體積分數(shù)為15%的乙腈溶液溶解殘余物并渦旋,以3000 r/ min的速度離心,把已經(jīng)制備凈化好的樣品液進樣到液相色譜分析。
3 液相色譜儀測定飼料中黃曲mei素含量的色譜條件
色譜柱：Vertex 色譜柱 150mm×4.6mm×5μm；
流動相：乙腈溶液；
檢測器：熒光檢測器，波長：λEx= 360 nm , λEm = 440 nm；
流速：1.0mL/min;
溫度：25℃；
進樣量：20μL。
4 液相色譜儀測定飼料中黃曲mei素含量的液相色譜圖
利用上述液相色譜條件，5種黃曲mei毒素B1、B2、G1、G2、M1在10 min內(nèi)即可獲得很好的分離效果。
在含有黃曲mei毒素B1的飼料樣品中添加5種黃曲mei毒素,利用自制凈化柱凈化，然后進樣分析。
5.液相色譜儀測定飼料中黃曲mei素含量的結(jié)果討論
由于黃曲mei素的毒性很大,現(xiàn)在對黃曲mei素的*達到2～4μg/kg以下甚至更低。對黃曲mei素含量的*越低,表明對檢測儀器和方法的要求越高。復(fù)雜的操作、大量的有機試劑、嚴格的防護條件及對操作者的損害等都不適合形勢發(fā)展的要求。試驗用免疫親和色譜-HPLC法代替了常用的薄層法,減少了操作步驟和有機溶劑的損耗。國標食品中黃曲mei素的測定采用柱后衍生化HPLC-熒光光度法,試驗采用了這一方法,對儀器的要求降低了。
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