1試驗(yàn)部分
1.1 儀器與試劑
Agilent-7890B氣相色譜儀（美國(guó)Agilent 公司），配有電子捕獲檢測(cè)器（μECD）和火焰光度檢測(cè)器（FPD）； 色譜柱：D B-17M S 毛細(xì)管柱，30m ×250μm ×0.25μm（美國(guó)J& W 公司）；離心機(jī)；旋渦混合器（德國(guó)IK A 公司）；恒溫氣浴振蕩搖床（德國(guó)IK A 公司）；固相萃取裝置（美國(guó)SU PELCO 公司）；氮吹濃縮儀；ENVI-18 固相萃取小柱（美國(guó)SU PELCO公司）。
標(biāo)準(zhǔn)溶液：由中國(guó)農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所研制（濃度均為l00 μg/m L）；所用溶劑中除乙酸乙酯、正己烷為色譜純外，其余為分析純，其中中性氧化鋁填料于使用前400℃烘烤2 h，降溫后備用，無(wú)水疏酸鈉于使用前需650℃烘烤4 h，降溫后保存在干燥器內(nèi)備用；水為三重過(guò)濾去離子水。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 提取方法。
稱取10 g 試樣置于50 m L 離心管中，加入4 m L 水，加入4 g 氯化鈉，接著加入8 m L乙腈溶液，旋渦混合１m in，放在恒溫氣浴振蕩搖床上振蕩15 m in，4500 r/m in 離心5 m in，上清液按1.2.2 方法進(jìn)行凈化，殘?jiān)性偌尤? m L 乙腈溶液提取一次，上清液也按1.2.2 方法進(jìn)行凈化。
1.2.2 凈化方法。
在EN V I-18 固相萃取柱上端依次填入約5 m m 高的中性氧化鋁填料，再填入約5 m m高的無(wú)水硫酸鈉，用4 m L 乙腈預(yù)淋洗柱子，棄去流出液，然后將上述1.2.1 的上清液慢慢轉(zhuǎn)移至柱中，收集全部流出液于15 m L 離心管中，于40℃下氮吹至近干，zui后準(zhǔn)確移取1 m L 乙酸乙酯－正己烷（體積比1:1，色譜純）定容洗脫，過(guò)膜，裝入進(jìn)樣瓶，分別供G C-μECD 和G C-FPD 分析。
1.2.3 儀器參數(shù)與測(cè)定條件
1.2.3.1 有機(jī)磷類農(nóng)藥（以下簡(jiǎn)稱第Ⅰ組），用G C-FPD 來(lái)測(cè)定。色譜柱：D B-17M S 石英毛細(xì)管柱，30 m×250μm×0.25μm ；柱升溫程序：100 ℃保持1 m in，以10 ℃/m in 升至120 ℃，再以15 ℃/m in 升至190 ℃，然后以6℃/m in 升至230 ℃，zui后以30℃/m in 升至290 ℃保持7 m in；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測(cè)器（FPD）溫度：240 ℃；氫氣：75 m L/m in；空氣：100 m L/m in；載氣：氮?dú)?，純度大于等?9.99% ，流量50 m L/m in；進(jìn)樣量：2 μL。在上述色譜條件下農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、大黃魚樣品以及樣品添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜見圖1。
1.2.3.2 有機(jī)氯和擬除蟲菊酯農(nóng)藥（以下簡(jiǎn)稱第Ⅱ組），用G C-μECD 來(lái)測(cè)定。色譜柱：D B-17M S 石英毛細(xì)管柱，30 m×250 μm ×0.25 μm ；柱升溫程序：80 ℃保持1 m in，以20 ℃/m in 升至240 ℃保持3 m in，再以10 ℃/m in 升至260 ℃保持4 m in，zui后以10 ℃/m in 升至290 ℃保持9 m in；進(jìn)樣口溫度：240 ℃；檢測(cè)器（μECD）溫度：310 ℃；載氣：氮?dú)?，純度大于等?9.99% ，流量50 m L/m in；進(jìn)樣量：2μL。在上述色譜條件下農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品、大黃魚樣品以及樣品添加混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜見圖2。
2 結(jié)果與分析
2.1 樣品前處理?xiàng)l件的選擇
2.1.1 提取。
對(duì)于動(dòng)物源性食品中的農(nóng)藥殘留，一般認(rèn)為用脂溶性溶劑將油脂一起提取出來(lái)，提取效率比較高，但該方法會(huì)同時(shí)帶出大量雜質(zhì)，給凈化帶來(lái)困難。乙腈作為一種通用的提取溶劑在藥物殘留檢測(cè)方面得到了廣泛的運(yùn)用，乙腈對(duì)大多數(shù)農(nóng)藥均有較好的溶解度且脂肪在乙腈中的溶解度較小，而且乙腈與凈化時(shí)的固相萃取柱相相匹配，無(wú)需濃縮可直接過(guò)柱，因此本研究考慮使用乙腈作為提取溶劑。但由于單純使用乙腈提取時(shí)，魚肉會(huì)凝結(jié)在一起不利于有機(jī)溶劑在水產(chǎn)品組織中的滲透提取。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)加入4 m L 水，可以增加乙腈對(duì)肌肉的滲透性，魚肉組織得到*分散，有利于提高提取效率，而同時(shí)加入氯化鈉使蛋白質(zhì)與氯化鈉相互作用，從而肌肉組織呈稀泥狀，整個(gè)提取體系狀態(tài)非常均一，利用氯化鈉的鹽析作用，高速離心使水相和有機(jī)相分離，以除去水和水溶性雜質(zhì)，同時(shí)還可減少提取液中的干擾基質(zhì)含量并提高待測(cè)物在乙腈相中的分配比。離心后的溶液偶有乳化現(xiàn)象，可振搖幾下再離心，即可消除乳化。
2.1.2 凈化。
Envi-18 柱的硅膠上接有十八烷基，有較高的相覆蓋率和碳含量，對(duì)非極性物質(zhì)有較高的容量，Envi-18 柱配合乙腈作為正相柱使用，同時(shí)結(jié)合中性氧化鋁一起作用，對(duì)油脂的去除有十分顯著的效果，同時(shí)還可以除去大部分弱極性的雜質(zhì)。在柱上裝入無(wú)水硫酸鈉，預(yù)先除去提取液中殘余的極少量水分。提取液過(guò)柱后呈無(wú)色透明，凈化效果良好，且對(duì)多種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯、有機(jī)磷三種不同類型的農(nóng)藥均有滿意的回收率。而且本方法的提取液不必濃縮，可直接過(guò)柱，操作簡(jiǎn)便。
2.2 方法的線性范圍、定量下限、回收率和精密度
根據(jù)14 種農(nóng)藥在氣相色譜中的響應(yīng)值和各進(jìn)出口國(guó)*，確定各種農(nóng)藥在混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液中的濃度，其中α- 硫丹、β- 硫丹、硫丹硫酸鹽0.005 μg/m L，其余11 種農(nóng)藥均為0.05 μg/m L。再由混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液稀釋成5 個(gè)不同濃度的混合標(biāo)樣，用氣相色譜進(jìn)行分析，以峰面積對(duì)質(zhì)量濃度做線性回歸分析，線性方程和相關(guān)系數(shù)見表1 和表2。用本方法對(duì)大黃魚添加水平為0.001~0.01 m g/kg 的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行平行6 次實(shí)驗(yàn)，其中α 硫丹、β 硫丹、硫丹硫酸鹽的定量下限（S/N≥10）為0.001 m g/kg，其余各項(xiàng)目的定量下限均小于0.01 m g/kg。方法平均回收率為63% ～110% ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.1% ～10.5% ，結(jié)果較為理想。
3 結(jié)論
本文以脂肪含量較高的大黃魚為研究對(duì)象，建立了用一種前處理方法同時(shí)檢測(cè)大黃魚中多種有機(jī)氯、擬除蟲菊酯和有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的分析方法。該方法的步驟簡(jiǎn)單、試劑用量少、效果良好，方法回收率及精密度均符合殘留分析要求，適合于監(jiān)控大黃魚中的多種農(nóng)藥殘留。通過(guò)喂養(yǎng)的方式給藥，分析農(nóng)藥在魚體內(nèi)代謝和殘留情況，這有待于今后進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。
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